Use LEFT and RIGHT arrow keys to navigate between flashcards;
Use UP and DOWN arrow keys to flip the card;
H to show hint;
A reads text to speech;
24 Cards in this Set
- Front
- Back
|
formule resolutie
en wat is een goede resolutie? |
r = 0.5lamda/NA
lamda = golflengte licht
hoe kleiner de afstand, hoe "hoger de resolutie", hoe beter |
|
|
helderveldkleuringen |
1. positief-kleuringen 2. negatief-kleuringen 3. differentiele kleuringen |
|
|
positief-kleuringen helderveldmicroscopie |
positief geladen organische kleurstoffen binden = kleuren negatief geladen celmateriaal
voorbeelden kleurstof: methyleenblauw, kristalviolet, safranine
voorbeelden celmateriaal: celoppervlak, nucleinezuren, zure polysaccharides |
|
|
procedure positief-kleuringen helderveldmicroscopie |
1. kultuur dun op objectglas uitstrijken 2. drogen aan de lucht 3. fixeren met hitte (door de vlam) 4. kleuring overheen, spoelen, laten drogen 5. bekijken onder microscoop |
|
|
negatief-kleuringen helderveldmicroscopie |
tegendeel van positief-kleuringen |
|
|
differentiele kleuring helderveld microscopie |
kleuringen die verschillende soorten cellen verschillend kleuren, belangrijk:
Gram-kleuring bacterien kunnen in 2 groepen ingedeeld worden op basis van eigenschappen celwand: 1. Gram-positief 2. Gram-negatief |
|
|
Gram positieve celwand
+ voorbeeld |
- binnen celmembraan - buiten dikke peptidoglycaanlaag = murein
voorbeeld: S.aureus |
|
|
Gram negatieve celwand
+ voorbeeld |
- binnen celmembraan - dan dunne peptidoglycaanlaag, omringd van periplasma - buiten tweede membraan (lipopolysaccharoides en protein)
voorbeeld: E.coli |
|
|
Gramkleuring procedure |
1. bacteriencultuur dun op dekglaasje uitsmeren 2. aan de lucht laten drogen 3. hitte-fixatie door vlam bunsenbrander 4. kristalviolet kleuring 1 min, afspoelen met H2O 5. iodiumoplossing toevoegen 6. ontkleuren met alcohol 20 sec, afspoelen H2O 7. tegenkleuren met fuchsine, afspoelen H2O 8. onder LM 1000x met immersieolie bekijken |
|
|
Hoe reageren de bacterien op de Gram-kleuring? (stappen procedure) |
begin: alle cellen kleurloos Kristalviolet: alle cellen paars/blauw Iodiumoplossing: nog steeds paars/blauw Alkohol: Gram + paars/blau en Gram- kleurloos Fuchsine: Gram + paars/blauw en Gram- roze
volgorde: K - I - A - F |
|
|
twee vormen lichtmicroscopie die het contrast vehogen zonder kleuring/fixatie |
donkerveld en fase-contrast microscopie |
|
|
principe fase-contrast microscopie |
- cellen verlangzamen het licht dat door ze heen gaat anders dan hun omgeving. licht dat door een cel heen gaat verschilt in fase t.o.v. het licht dat door de omgevende vloeistof gaat. - een fasering versterkt dit verschil in fase --> versterkt contrast. - voor structuren/cellen die qua dichtheid weinig verschillen i.v.m. hun omgeving, alternatief tot kleuringen |
|
|
principe donkerveld microscopie |
licht komt alleen van de zij --> alleen licht dat teruggekaatst word door speciemen is te zien
resultaat: licht speciemen op donker achtergrond (in tegenstelling tot helderveld donker speciemen op licht achtergrond) - beste resolutie van helder/fase/donker LM |
|
|
kleurspectrum |
paars - blauw - groen - geel - oranje - rood
400 430 480 550 580 640 - 430 - 480 -550 - 580 - 640 - 700
blauw kortgolvig, rood langgolvig |
|
|
principe fluorescentie lichtmicroscopie
+ voorbeeld kleurstof |
structuren zijn autofluorescent of worden aangetoond met fluorescerende kleuringen
excitatie --> preparaat --> emissie
voorbeeld kleurstof: DAPI (blauw, bindt aan DNA) |
|
|
principle electronenmicroscopie in vergelijking met lichtmicroscopie |
- electronen i.p.v. fotonen - electromagneet i.p.v. lens - vacuum, camera - fotos: zwart-wit |
|
|
waarom is de resolutie hoger bij EM dan bij LM |
electronen hebben een kortere golflengte --> formule resolutie |
|
|
nadeel EM |
speciemen moet in schijfjes gesneden worden omdat electronen niet door een hele cel heen kunnen --> dure procedure --> celdood/ artefacten |
|
|
TEM procedure |
preparaat (cellen) 1. chemisch fixeren met b.v. formaldehyde 2. dehydreren met b.v. ethanol 3. inbedden in plastic b.v. epon 4. snijden microtoom 60 nm 5. --> TEM
stains can higher the contrast |
|
|
resolutie TEM |
0.2 nm |
|
|
principe SEM |
- bekijken oppervlaktestructuur - specimen gecoat met zwaar metaal b.v. goud - electronen worden teruggekaatst door goud en opgevangen door een detector - bekijken groot specimen mogelijk - goede depth of field
|
|
|
resolutie SEM |
5 nm |
|
|
electronmicrograaf |
= foto uit electronenmicroscoop |
|
|
principe 3D electronenmicroscopie |
1. preparaat gefixeerd, gedehydreerd, ingebed in plastic 2. hoger voltage + dikkere coupes dan TEM (300 nm) 3. electron micrographs van verschillende hoeken genomen 4. alle micrographs samen geven 3D beeld = tomogram 5. op verschillende segementen van het tomogram kun je structuren natekenen 6. --> 3D model |
